Materiais e reagentes
- Cromatógrafo líquido com detector UV ou espectrômetro de massas triplo quadrupolo (LC-MS/MS) (1)
- Coluna C18 de fase reversa (ex: 150 × 4,6 mm, 5 µm) (1)
- Cartuchos de extração em fase sólida C18 de 500 mg (1 por amostra)
- Metanol e acetonitrila grau HPLC
- Padrão de diuron, surrogate (ex: carbazol) e padrão interno isotópico (diuron-d₆) para LC-MS/MS
- Tampão Trizma e sulfato de cobre para preservação
- Filtros de seringa de 0,22 µm
Procedimento
- CalibraçãoPrepare pelo menos cinco níveis de padrão de diuron no mesmo solvente do extrato final.
- Extração em fase sólidaPasse 500 mL de amostra pelo cartucho C18 condicionado e seque o sorvente com vácuo.
- EluiçãoElua com metanol em três porções e ajuste o volume final para 1 mL.
- Análise por HPLC-UVSepare em coluna C18 com gradiente de água e acetonitrila e leia o diuron a 245 nm. Confirme em uma segunda coluna.
- Alternativa por LC-MS/MSInjete a amostra filtrada, com ou sem concentração, e monitore as transições m/z 233 → 72 e 233 → 160 em modo positivo.
- Controle de qualidadeAnalise um branco, uma amostra fortificada e confira a recuperação do surrogate em cada lote.
Cálculo
Quantificação por padrão interno C (µg/L) = (Aₓ / Aₚᵢ) × (Cₚᵢ / RRF)
- Aₓ: área do pico do analito na amostra
- Aₚᵢ: área do pico do padrão interno
- Cₚᵢ: concentração do padrão interno adicionado (µg/L)
- RRF: fator de resposta relativo, médio da curva de calibração
Concentração no extrato para a água C (µg/L) = Cₑ × Vₑ / Vₐ
- Cₑ: concentração no extrato (µg/mL)
- Vₑ: volume final do extrato (mL)
- Vₐ: volume de amostra extraído (L)
Coleta e preservação
Frasco de vidro de 500 mL, de preferência âmbar, com tampa de PTFE. Pelo EPA 532, adicione 0,25 g de sulfato de cobre (biocida) e 2,5 g de Trizma (tampão pH 7, que também neutraliza o cloro). Mantenha a no máximo 10 °C no transporte e a no máximo 6 °C no laboratório, sem congelar. Extraia em até 14 dias e analise o extrato em até 21 dias.
Cuidados e segurança
- Use luvas de nitrila e óculos e trabalhe na capela ao manusear metanol e acetonitrila, que são inflamáveis e tóxicos.
- Os padrões analíticos são concentrados e tóxicos. Prepare as diluições na capela e descarte os resíduos como resíduo químico perigoso.
- O sulfato de cobre é tóxico para organismos aquáticos. Não descarte sobras de amostra preservada na pia.