Materiais e reagentes
- Cromatógrafo líquido com sistema de derivatização pós-coluna e detector de fluorescência, ou LC-MS/MS (1)
- Coluna C18 específica para carbamatos (1)
- Solução de hidróxido de sódio para hidrólise pós-coluna (reagente)
- Reagente de o-ftalaldeído (OPA) com 2-mercaptoetanol ou N,N-dimetil-2-mercaptoetilamina
- Padrões de tiodicarbe e metomil e surrogate (BDMC)
- Metanol grau HPLC e água ultrapura
- Filtros de seringa de 0,45 µm
Procedimento
- CalibraçãoPrepare pelo menos cinco níveis de padrão de tiodicarbe e de metomil em água reagente preservada como as amostras.
- Injeção diretaFiltre a amostra e injete um volume grande (até 1000 µL) sem extração.
- SeparaçãoSepare os carbamatos na coluna C18 com gradiente de água e metanol.
- Hidrólise pós-colunaMisture o efluente com NaOH e aqueça a cerca de 80 a 100 °C. O carbamato libera metilamina.
- DerivatizaçãoA metilamina reage com o OPA e o tiol, formando um isoindol fluorescente. Leia com excitação a 330 nm e emissão a 465 nm.
- Alternativa por LC-MS/MSInjete a amostra filtrada e monitore as transições do tiodicarbe (m/z 355 → 88) e do metomil (m/z 163 → 88).
- Controle de qualidadeEm cada lote, analise um branco de reagentes, uma amostra fortificada e confira a recuperação do surrogate (BDMC).
- InterpretaçãoInforme tiodicarbe e metomil, já que parte do tiodicarbe pode ter virado metomil entre a coleta e a análise.
Cálculo
Calibração externa C (µg/L) = (A − b) / a × FD
- A: área do pico na amostra
- a: inclinação da curva de calibração
- b: intercepto da curva de calibração
- FD: fator de diluição
Recuperação do surrogate ou da amostra fortificada R (%) = (Cₘ − Cₐ) / Cₛ × 100
- Cₘ: concentração medida na amostra fortificada (µg/L)
- Cₐ: concentração na amostra sem fortificação (µg/L), zero para o surrogate
- Cₛ: concentração adicionada (µg/L)
Coleta e preservação
Frasco de vidro âmbar de 60 mL com tampa de PTFE. Pelo EPA 531.2, adicione tiossulfato de sódio (80 mg/L) para o cloro e citrato diácido de potássio (cerca de 9,3 g/L) para baixar o pH a 3,8 e evitar a hidrólise dos carbamatos. Mantenha a no máximo 10 °C no transporte e a no máximo 6 °C no laboratório, sem congelar, e analise em até 28 dias.
Cuidados e segurança
- Carbamatos inibem a acetilcolinesterase. Manuseie padrões concentrados com luvas e na capela.
- O 2-mercaptoetanol tem cheiro forte e é tóxico. Prepare o reagente de OPA na capela.
- A linha pós-coluna trabalha quente e sob pressão. Desligue e espere esfriar antes de abrir conexões.