Materiais e reagentes
- Cápsula filtrante (Envirochek HV ou Filta-Max) e bomba com medidor de vazão
- Centrífuga com rotor oscilante e tubos cônicos
- Kit de separação imunomagnética (IMS) para Giardia e Cryptosporidium
- Anticorpos monoclonais marcados com FITC e corante DAPI
- Microscópio de epifluorescência com contraste de interferência (DIC), aumento de 200 a 1.000 vezes
- Suspensões de cistos e oocistos para controle de recuperação
Procedimento
- FiltraçãoPasse pelo menos 10 L de amostra pela cápsula filtrante, anotando o volume exato.
- EluiçãoLave a cápsula com solução de eluição e agitação para soltar cistos e oocistos.
- ConcentraçãoCentrifugue o eluato e reduza o volume do sedimento.
- Separação imunomagnéticaUse esferas magnéticas com anticorpos para separar cistos e oocistos dos detritos.
- ColoraçãoFixe na lâmina e core com anticorpos FITC (imunofluorescência) e com DAPI.
- LeituraExamine a lâmina inteira e confirme cada estrutura pela forma, tamanho, fluorescência e DAPI, com apoio do DIC.
- ControleFaça periodicamente amostras com quantidade conhecida de cistos e oocistos para medir a recuperação do método.
Cálculo
Concentração Cistos ou oocistos por litro = N / V
- N: número de cistos ou oocistos confirmados na lâmina
- V: volume de amostra que de fato foi examinado (L)
Coleta e preservação
Galões de 10 L ou mais, ou filtração em campo direto na cápsula. Transporte refrigerado entre 1 e 10 °C, sem congelar. A eluição deve começar em até 96 horas após a coleta.
Cuidados e segurança
- Patógenos de risco biológico. Requer técnica asséptica e EPI.
- Trabalhe em cabine de segurança biológica e descontamine o material antes do descarte.