Legionella

• Membranas filtrantes de 0,2 a 0,45 µm e sistema de filtração
• Ágar BCYE e ágar seletivo GVPC
• Ágar BCYE sem L-cisteína para confirmação
• Tampão ácido pH 2,2 e banho-maria a 50 °C
• Estufa a 36 ± 2 °C com umidade
• Kit de aglutinação em látex para Legionella pneumophila
• Termociclador de PCR em tempo real e kit de qPCR para Legionella (alternativa)

1. ConcentraçãoFiltre um volume conhecido da amostra (em geral 1 L) e solte as bactérias da membrana em pouco volume.
2. TratamentosSepare porções do concentrado: uma sem tratamento, uma com calor (50 °C por 30 min) e uma com ácido (pH 2,2 por 5 min). Isso reduz as outras bactérias.
3. SemeaduraSemeie cada porção em ágar GVPC.
4. IncubaçãoIncube a 36 °C por 7 a 10 dias, lendo as placas várias vezes nesse período.
5. ConfirmaçãoRepique as colônias suspeitas em BCYE e em BCYE sem cisteína. Legionella só cresce com cisteína.
6. IdentificaçãoUse aglutinação em látex para separar L. pneumophila sorogrupo 1, sorogrupos 2 a 14 e outras espécies.
7. Alternativa rápidaqPCR (ISO/TS 12869) dá resultado em horas, em unidades genômicas por litro (UG/L). Detecta também células mortas, então serve para triagem; a contagem oficial em UFC segue a cultura.

Frasco estéril de 1 L com tiossulfato de sódio, para neutralizar o cloro. Em chuveiros e torneiras, colete a primeira água para avaliar o ponto de uso. Transporte entre 2 e 8 °C, no escuro, e analise no mesmo dia, no máximo em 24 horas.