Materiais e reagentes
- Cromatógrafo líquido acoplado a espectrômetro de massas em tandem (LC-MS/MS)
- Coluna adequada para compostos muito polares (ex.: C18 para fase aquosa ou carbono grafitizado)
- Padrão de Acrilamida
- Padrão interno marcado (acrilamida-d3 ou ¹³C₃-acrilamida)
- Metanol grau LC-MS
- Ácido fórmico grau LC-MS
- Água ultrapura
Procedimento
- Padrão InternoAdicione o padrão interno marcado a uma alíquota da amostra.
- PreparoFiltre a amostra em membrana de 0,45 µm (ou 0,22 µm). Se precisar de mais sensibilidade, concentre por extração em fase sólida.
- InjeçãoInjete no LC-MS/MS com fase móvel aquosa acidificada com ácido fórmico e pouco metanol.
- DetecçãoMonitore as transições MRM da acrilamida e do padrão interno em ionização por electrospray positivo.
- QuantificaçãoCalcule a concentração pela curva de calibração com padrão interno.
- Controle de QualidadeAnalise branco e amostra fortificada em cada lote.
Coleta e preservação
Coleta: Frasco de vidro âmbar com tampa revestida de PTFE. Preservação: Refrigerar a no máximo 6 °C, sem congelar, e analisar o quanto antes.
Cuidados e segurança
- Acrilamida é neurotóxica e suspeita de ser carcinogênica.