Materiais e reagentes
- HPLC com detector UV (360 nm)
- Coluna de fase reversa C18
- Solução de DNPH (2,4-dinitrofenilhidrazina)
- Tampão citrato (pH 3)
- Cartuchos de extração em fase sólida C18
- Etanol e acetonitrila grau HPLC
- Padrões de aldeídos
Procedimento
- DerivaçãoAjuste um volume conhecido da amostra a pH 3 com tampão citrato, adicione a solução de DNPH e deixe reagir aquecido (cerca de 40 °C) por 1 hora.
- ReaçãoOs aldeídos reagem com o DNPH e formam hidrazonas estáveis.
- ExtraçãoPasse a amostra derivada por cartucho C18 e elua as hidrazonas com etanol.
- AnáliseAnalise o eluato por HPLC-UV a 360 nm e quantifique pela curva de calibração.
- Controle de QualidadeRode um branco com água reagente. O formaldeído contamina reagentes e o ar do laboratório com facilidade.
Coleta e preservação
Coleta: Frasco de vidro âmbar com tampa revestida de PTFE. Preservação: Adicionar agente declorante no frasco e refrigerar a no máximo 6 °C. Analisar o quanto antes.
Cuidados e segurança
- DNPH seco é inflamável e pode ser explosivo: mantenha umedecido, como vem do fabricante.
- Formaldeído é carcinogênico e irritante: prepare padrões em capela.
- Acetonitrila e etanol são inflamáveis; acetonitrila é tóxica.